該儀器主要由溶劑輸送系統(tǒng)(高壓輸液泵)等組成。其核心是填充有多孔凝膠顆粒的色譜柱——大分子因無法進(jìn)入孔隙而快速流出,小分子可深入孔道、路徑更長(zhǎng)、保留時(shí)間更久,從而實(shí)現(xiàn)按分子尺寸從大到小的分離。檢測(cè)器常采用示差折光檢測(cè)器(RID)、紫外檢測(cè)器(UV)、粘度檢測(cè)器或多角度激光光散射檢測(cè)器(MALS),結(jié)合標(biāo)準(zhǔn)曲線或絕對(duì)檢測(cè)方法,精確計(jì)算分子量及其分布(PDI)。
確認(rèn)柱子型號(hào)與實(shí)驗(yàn)需求匹配(如分離范圍、孔徑大?。?/div>
檢查柱子兩端篩板是否完好,無堵塞或破損。
安裝時(shí)避免柱子彎曲或受壓,確保連接緊密但不過度擰緊。
二、試劑與樣品準(zhǔn)備
1、標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)備
配制已知分子量的標(biāo)準(zhǔn)品溶液(如聚苯乙烯標(biāo)準(zhǔn)品),濃度通常為1-5mg/mL。
過濾標(biāo)準(zhǔn)品溶液(0.22μm濾膜),避免顆粒進(jìn)入系統(tǒng)。
2、樣品處理
溶解:將樣品完q溶解于流動(dòng)相中,濃度建議為1-2mg/mL(過高可能導(dǎo)致柱過載)。
過濾:使用與標(biāo)準(zhǔn)品相同的濾膜過濾樣品,確保無顆?;蚓奂w。
脫氣:若樣品含氣泡,需短暫超聲處理(注意避免樣品降解)。
3、流動(dòng)相與試劑儲(chǔ)存
流動(dòng)相應(yīng)避光保存,防止溶劑揮發(fā)或變質(zhì)。
標(biāo)準(zhǔn)品和樣品溶液需新鮮配制,避免長(zhǎng)時(shí)間存放導(dǎo)致分子量變化。
三、系統(tǒng)清洗與平衡
1、初始清洗
用純流動(dòng)相沖洗系統(tǒng)(泵、進(jìn)樣器、柱子、檢測(cè)器)至少30分鐘,去除殘留溶劑或雜質(zhì)。
觀察基線是否穩(wěn)定,無漂移或噪聲。
2、柱子平衡
以流動(dòng)相為溶劑,以實(shí)驗(yàn)流速(通常1mL/min)平衡柱子至少1小時(shí),確保凝膠充分溶脹。
平衡過程中監(jiān)測(cè)柱壓,若壓力持續(xù)升高可能提示柱子堵塞或凝膠未完q溶脹。
3、檢測(cè)器調(diào)零
在空白流動(dòng)相條件下,調(diào)整檢測(cè)器基線至零點(diǎn),消除背景信號(hào)干擾。
四、參數(shù)設(shè)置與預(yù)運(yùn)行
1、方法參數(shù)設(shè)置
流速:根據(jù)柱子推薦值設(shè)置(如1mL/min),避免過高導(dǎo)致柱壓異常。
柱溫:通常為25-40℃,需保持恒定以減少數(shù)據(jù)波動(dòng)。
進(jìn)樣量:根據(jù)柱子容量設(shè)置(如50-200μL),避免過量導(dǎo)致峰形展寬。
檢測(cè)波長(zhǎng):根據(jù)樣品特性選擇(如UV檢測(cè)器常用254nm或280nm)。
2、預(yù)運(yùn)行測(cè)試
注入空白流動(dòng)相,檢查基線穩(wěn)定性(漂移應(yīng)<0.5mV/h)。
注入標(biāo)準(zhǔn)品溶液,驗(yàn)證保留時(shí)間、峰形和分離度是否符合要求。
若標(biāo)準(zhǔn)品峰形異常(如拖尾、肩峰),需重新清洗柱子或調(diào)整流速。
3、數(shù)據(jù)采集系統(tǒng)校準(zhǔn)
確保數(shù)據(jù)處理軟件(如GPC軟件)與儀器連接正常,時(shí)間軸和信號(hào)采集同步。
設(shè)置分子量校正曲線(若使用標(biāo)準(zhǔn)品法),輸入標(biāo)準(zhǔn)品分子量與保留時(shí)間數(shù)據(jù)。
